代谢表型试验该如何操作？一起来看下

　　参与药物代谢的CYP450酶主要为CYP1、CYP2和CYP3三个家族，共有7种重要的亚型，分别为CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4。如选用特异的选择性抑制剂抑制不同亚型的酶的活性，便可研究药物的酶代谢表型。

　　根据微粒体种属的不同，可根据实际需求选择人肝微粒体、恒河猴肝微粒体、比格犬肝微粒体、大鼠肝微粒体和小鼠肝微粒体中的一种。需于-70℃冰箱冷冻保存，切记避免反复冻融。代谢表型试验具体操作如下：
 

　　1、试验组：

　?。?）冰浴融化试剂盒各组分，置于冰上待用；

　?。?）除微粒体外，将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀，于37℃预孵育5min；

　?。?）将以上混合液195μL/管分装至1.5mL离心管中，于37℃水浴中保温，5μL/反应加入肝微粒体，吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应，使用秒表计时；

　?。?）于设定孵育时间点，向孵育体系中加入200μL预冷的乙腈终止反应（预冷乙腈：孵育体系体积=1:1）。

　　2、对照组：

　?。?）加阳性底物组：反应体系中不加选择性抑制剂，并将受试物换为阳性底物，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐；

　?。?）无抑制剂组：反应体系中不加选择性抑制剂，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐；

　?。?）无A液、B液组：反应体系中不加A液和B液，其它组分加入量不变，缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐。

　　代谢表型试验注意事项：

　　1、试验开始前，请自行准备1.5mL离心管、不同规格枪头、乙腈、37℃水浴锅等。

　　2、仅供科研使用，不能用于人体及动物的治疗或临床诊断。

　　3、使用前，需于冰浴条件下解冻并混合均匀。

　　4、于-70℃冰箱冷冻保存，切勿反复冻融。

　　5、在使用过程中，也可根据实际实验需求调整各组分的加入量。